Toolgen ha annunciato di aver riportato tre tecniche rivoluzionarie in riviste scientifiche di alto livello. Il primo studio presenta un nuovo test basato sulle cellule, chiamato TAgmentation of Prime Editor sequencing (TAPE-seq), in grado di prevedere i candidati off-target a livello genomico per i prime editor (PE). I PE sono strumenti potenti che consentono un editing del genoma più preciso, ma finora i metodi per prevedere gli effetti fuori bersaglio si sono basati sull'analisi dell'attività delle nucleasi o delle nickasi Cas9.

TAPE-seq di Toolgen è il primo esperimento al mondo di previsione degli effetti fuori bersaglio a livello genomico che utilizza direttamente le PE. TAPE-seq mostra un tasso di errore inferiore e un'accuratezza superiore rispetto ai metodi esistenti e può identificare siti off-target validi che non sono stati individuati da altri metodi. I risultati sono stati pubblicati su Nature Communications nel dicembre 2022.

Il secondo studio presenta un nuovo metodo di previsione off-target a livello di genoma, chiamato Extru-seq. Finora sono stati riportati più di 20 metodi di predizione off-target a livello genomico per CRISPR, che sono stati classificati come basati su cellule, in vitro o in silico. C'erano pro e contro per ogni metodo basato su cellule o in vitro.

Extru-seq di Toolgen ha rotto la barriera tra questi metodi, utilizzando un estrusore per generare uno stato tra quello cellulare e quello in vitro. Di conseguenza, questo metodo combina le caratteristiche vantaggiose dei metodi basati su cellule e in vitro, dimostrando un alto tasso di convalida e di conservazione delle informazioni sull'ambiente intracellulare, oltre a un basso tasso di errori. L'Extru-seq può essere facilmente eseguito in tipi di cellule clinicamente rilevanti con poca ottimizzazione.

I risultati sono stati pubblicati su Genome Biology nel gennaio 2023. Infine, il terzo studio presenta una versione migliorata di una nucleasi Cas9 ad alta fedeltà, chiamata Sniper2L, che presenta una maggiore specificità con un'attività elevata. Sono stati riportati diversi mutanti di Cas9, che sostengono di mostrare una migliore specificità.

Tuttavia, studi successivi hanno dimostrato che esiste una correlazione inversa tra l'attività generale e le specificità generali di queste proteine Cas9 mutanti, che sono state definite come limiti teorici. Sniper2L di Toolgen ha superato questa limitazione per mostrare alte specificità senza perdere le attività generali. Ciò pone le strategie brevettuali di Toolgen in una posizione di vantaggio, in quanto Toolgen può ora rendere sempreverdi i suoi brevetti utilizzando il suo biobetter Sniper2L.

I risultati sono stati pubblicati su Nature Chemical Biology nel marzo 2023. I risultati sono stati selezionati per una presentazione orale (Sniper2L) e due presentazioni di poster (Extru-seq e TAPE-seq) alla Conferenza dell'American Society of Gene & Cell Therapy (ASGCT) che si terrà a Los Angeles dal 16 maggio 2023 al 20 maggio 2023.